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	recombinase-mediated cassette exchange 1.1 Gezielter Austausch von Genkassetten 1.2 Siehe auch: 1.3 Referenzen 1.4 Weblinks [Bearbeiten]
RMCE, recombinase-mediated cassette exchange
	[Bearbeiten]
Gezielter Austausch von Genkassetten
	als Verfahren der reversen Genetik und zur systematischen Modifikation höherer Zellen Die Produktion pharmazeutisch bedeutender Proteine wird häufig über die genetische Modifikation von Säugerzellen erreicht
	Dies bedingt Techniken des Gentransfers und die effiziente Ãœbersetzung der genetischen Information (Expression) in der Zielzelle
	Auf analogen Prinzipien beruhen moderne Ansätze zur Gentherapie
	nicht zuletzt deshalb
	Herkömmliche Verfahren der Modifikation tierischer Zellen sind wenig zuverlässig
	weil epigenetische Grundprinzipien noch zu wenig bekannt sind: eingeschleuste Gene integrieren nur sporadisch in das Erbmaterial der Wirtszelle
	dann oft an unpassenden Stellen
	und wenn sie es tun
	Infolgedessen wird das Fremdgen nicht oder nur unregelmäßig abgelesen oder bleibt inaktiv
	die Zellen werden instabil
	Zu allem Überfluss lösen sich die neu eingebauten Gene oft wieder aus dem Wirtsgenom heraus
	das Vektoren mit Werkzeugen der Hefe versieht: RMCE-Prinzip: Austausch genetischer Kassetten (´flip´)
	ermöglicht durch die RMCE Rekombinase (´Flp´) der Hefe
	Hier setzt das RMCE-Kassettenaustauschverfahren an
	F; Halbpfeile) zusammengestellt
	Der Einschub zeigt Mutanten (Fn) der natürlich vorkommenden FRT-Stelle (F)
	das Verfahren ermöglichen
	zu Sätzen (Fn
	die
	dessen Überleben durch eine Rekombinase (genannt "Flp") mit ungewöhnlichen Eigenschaften garantiert wird
	Im unteren Teil des Einschubs werden Expressionscharakteristiken nach konventionellem Transfer (links) und aufgrund von RMCE (rechts) dargestellt In den meisten Hefestämmen gibt es ein ´2-micron circle´ genanntes Gebilde
	Vier Monomere Moleküle dieses Enzyms binden an zwei identische
	kurze Erkennungsstellen (Flp-recombinase targets
	FRT; rote Halbpfeile in der Abbildung) und führen zu deren Rekombination (crossover)
	Das Resultat dieses Vorganges ist (je nach der relativen Orientierung der FRT-Stellen) eine Inversion (Umdrehen der von zwei entgegengesetzt orientierten FRT-Stellen eingerahmten Sequenz)
	eine ineffiziente Addition (Vereinigung zweier DNA-Segmente
	die eine gleichartige FRT-Stellen tragen). 1994 konnte das Spektrum dieser Möglichkeiten erweitert werden
	eine Deletion (Verlust einer von zwei gleichgerichteten FRTs eingerahmten Sequenz) oder
	in Umkehr dieses Vorganges
	die untereinander so effizient wie zwei Wildtyp-Stellen rekombinieren
	Hierfür wurden Mutanten (Fn; schraffierte Halbpfeile in der Abbildung) dieser FRT-Stellen (F) hergestellt
	Eines zeigen sie nicht: eine Kreuzrekombination der Art F x Fn
	die zur Deletion führen würde
	Damit befinden wir uns in der Situation der Abbildung: ein beliebiges Gen (hier ein zusammengesetztes Selektionsgen) wird durch einen Satz aus FRT-Stellen
	eingefasst; nach seiner Einführung in das Genom der Wirtszelle werden die Eigenschaften verschiedener Integrationsstellen charakterisiert und besonders geeignete Klone isoliert; das eigentlich interessierende Gen wird zwischen einen entsprechenden Satz an Fn und F Stellen (je ein roter und ein schraffierter Halbpfeil) kloniert und als Teil eines zirkulären Vektors in die Wirtszelle transferiert
	Fn und F
	Flp Rekombinase wird nun genutzt
	um einen doppelt-reziproken ´crossover´ zu induzieren
	z.B. mit der Absicht
	Dies Verfahren dirigiert nach dem "RMCE- Kassettenaustausch-Prinzip" das interessierende Gen exakt an den vorbestimmten Ort - ein Prozess
	der sich beliebig oft mit unterschiedlichen Konstrukten wiederholen lässt. Dieses neue Verfahren gelangt nicht nur für die rationale Konstruktion biotechnologisch bedeutender Zellinien Bedeutung
	sondern wird auch zunehmend für die systematische Modifikation von Stammzellen eingesetzt
	gezielt transgene Tiere zu schaffen. [Bearbeiten]
Siehe auch:
	Rekombination
	Crossing over [Bearbeiten]
	Rekombinase
Referenzen
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Weblinks
	http://www.uni-protokolle.de/nachrichten/id/18394/ Thematik im Ãœberblick (http://juergenbode.gmxhome.de/html/thematik.html)

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