Stichpunkte

Allgemein
	um Desoxyribonukleinsäure (DNA)-Stränge nach ihrer Größe zu trennen und um ihre Größe durch Vergleich mit Strängen bekannter Größe zu bestimmen
	Agarose-Gelelektrophorese ist eine molekularbiologische Methode
	Diese Gelelektrophorese funktioniert wie ein Sieb für Moleküle; ein elektrisches Feld wird verwendet
	um die negativ geladenen DNA-Moleküle durch die Gelmatrix zu ziehen
	wobei die kleineren DNA-Moleküle sich schneller durch das Gel bewegen können und somit eine Auftrennung der Stränge nach ihrer Größe ermöglicht wird. [Bearbeiten]
Material
	die nach ihrer Größe aufzutrennen ist. Eine DNA-Leiter
	Für die Agarose-Gelelektrophorese werden benötigt: Die DNA
	mit der die DNA-Probe verglichen werden kann
	um deren Größe zu bestimmen
	eine Mischung verschiedener DNA-Stränge bekannter Länge
	pH 8.0 EDTA
	0.5M
	z.B. ein niedermolekularer Farbstoff wie Bromphenol Blau
	DNA-Leitern sind kommerziell erhältlich. TBE-Puffer
	um den Fortschritt der Elektrophorese abschätzen zu können. Eine Gelkammer aus Plexiglas. Ein "Kamm" (normalerweise aus Plexiglas oder Teflon). [Bearbeiten]
	pH 8.0 Agarose Ethidiumbromid (5.25 mg/ml in H2O) Ein Farbmarker
	0.5×
Vorbereitung
	Herstellung einer 1% Agaroselösung in TBE; für kleine DNA-Fragmente bis zu 2%
	je nach Größe des Gels. Agarosegellösung kochen
	Volumen 15-70 ml
	normalerweise im Mikrowellenherd. Die Lösung bei Raumtemperatur bis auf ca
	dabei stetig rühren. 1 ml Ethidiumbromid pro 10 ml Gellösung dazugeben
	60 °C abkühlen lassen
	dann in die Gelkammer gießen. Den Kamm auf einer Seite des Gels hineinstecken
	bis sich das Ethidiumbromid gut verteilt hat
	Vorsicht: Ethidiumbromid ist mutagen! Die Lösung rühren
	ca
	5-10 mm vom Rand entfernt. Wenn das Gel fest geworden ist
	den Kamm entfernen
	die im Gel zurückbleiben
	werden Taschen oder Slots genannt. Das Gel in 0
	5× TBE-Laufpuffer legen
	Die Aussparungen
	Das Gel muss vollständig bedeckt sein
	Die Slots müssen an der negativen Elektrode der Kammer zu liegen kommen. Den Farbmarker zu den DNA-Proben hinzugeben
	Die DNA-Leiter enthält für gewöhnlich schon Farbmarker. [Bearbeiten]
Prozedur
	DNA-Leiter und -Proben mit einer Pipette in jeweils einen Slot spritzen (je nach Größe der Taschen von 2 µl bis zu 100 µl)
	Elektrische Spannung anlegen
	normalerweise 100 Volt bei xx mAmpere
	Wenn die "Farbfront" das Gel verlässt oder die Stränge genügend aufgetrennt sind
	Elektrophorese beenden. Schematische Darstellung der Elektrophorese Das Agarosegel mit 3 Slots (S). Einspritzen von DNA-Leiter in den ersten Slot. DNA-Leiter ist aufgetragen
	Proben 2 und 3 werden aufgetragen. Eine Spannung wird angelegt
	weil sie negativ geladen ist (Phosphatreste im "Rückgrat" der DNA). Kleine DNA-Fragmente wandern schnell
	Die DNA wandert zur positiv gelagenen Anode
	große langsam durch das Gel
	Die DNA ist währenddessen normalerweise nicht sichtbar
	die Elektrophorese ist komplett. Das Gel kann unter einer UV-Lampe betrachtet werden
	die sich schneller als selbst kleinste DNA-Fragmente durch das Gel bewegt. Die Farbfront hat das Ende des Gels erreicht
	Daher wird der Fortschritt an der Farbfront abgelesen
	Ethidiumbromid
	fluoresziert im ultravioletten Licht (Gesichtsschutz tragen!)
	das sich in die DNA eingelagert hat
	Eine DNA-Bande kann aus dem Gel ausgeschnitten und die DNA zur weiteren Verwendung aus dem Gel aufgereinigt werden. Siehe auch: SDS-PAGE en:Agarose gel electrophoresis ja:アガロースゲル電気泳動

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